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Informationen zur DPEG-Biotinylierung

Anzahl Durchsuchen:0     Autor:Site Editor     veröffentlichen Zeit: 2022-03-29      Herkunft:Powered

Die DPEG-Biotinylierung spielt in unserer Produktion und des Lebens eine entscheidende Rolle. Was sind die relevanten Informationen über DPEG Biotinylierung? Lassen Sie uns als nächstes einen Blick darauf werfen.

Hier ist das der Inhalt:

lVorbereitung des gezielten biotinylierten Nanobody- und IC-ELISA-Optimierungs- und Sensitivitätsvergleichs

lNanobodies, die in zwei Vektoren ausgedrückt werden, werden von der SDS-Seite überprüft

Vorbereitung des gezielten biotinylierten Nanobody- und IC-ELISA-Optimierungs- und Sensitivitätsvergleichs

Das Biotin-Avidin-System ist eine Signalverstärkungs-Technik, die üblicherweise in Immunoassays verwendet wird. Die spezifische Bindungsaffinität zwischen Biotin und Streptavidin kann 1015 l / mol erreichen, was viel höher ist als die Affinität des enzymmarkierten Sekundärantikörpers und des Antikörpers. Die Verwendung von SA-HRP anstelle des enzymmarkierten Sekundärantikörpers kann den Antikörpertiter erhöhen, wodurch die Empfindlichkeit erhöht wird. Die Herstellung des DPEG-Biotinylierungsantikörpers ist im Allgemeinen durch NHS-aktivierte Biotin- und Antikörperkupplung. Dieses chemische Kupplungsverfahren hat einen gewissen Grad an Zufälligkeit, und die Chargen variieren stark. Wenn sich die DPEG-Biotinylierungsstelle im Antigen-Antikörper-Bindungsbereich befindet, kann es auch dazu führen, dass die Aktivität des Antikörpers abnimmt. Daher wurde der Vektor verwendet, um ein AVI-Kurzes Peptid-Tag mit 15 Aminosäureresten in NB einzuführen. Unter der Katalyse der Biotin-Ligase kann der Lysinrest des AVI-Tags mit der DPEG-Biotinylierung mit der Biotin-Ligase unter milden und hochspezifischen Reaktionsbedingungen zusammenwirken, und die Biotinylierungsstelle kann unabhängig voneinander ausgebildet sein, um den Effekt der natürlichen Konformation des Antikörpers zu minimieren .

Die DPEG-Biotinylierung Nanobody, ausgedrückt von den beiden Vektoren, wurde von SDS-PAGE überprüft

Das Molekulargewicht von NBSM6 beträgt 18,6 ku, und das Molekulargewicht von NBSM6-BT beträgt 19,5 ku. Der Unterschied im Molekulargewicht der beiden Nanobodien ist hauptsächlich auf die verschiedenen Fusions-Tag-Fragmente der beiden Vektoren zurückzuführen. Da der Nanobody exprimiert und zum Periplasma der Zelle transportiert und der Biotin-Ligase im Zytoplasma exprimiert wird, ist es notwendig, die Zelle zu brechen, so dass der Nanobodörper mit der Biotin-Ligase in Kontakt steht, um den reibungslosen Abschluss der Biotinylierung zu gewährleisten. Optimieren Sie die Arbeitskonzentration an Antigen und Antikörper von NBSM6 und NBSM6-BT von der Tithertboard-Titration. Nach der Optimierung haben beide Antikörper die kleinsten IC50-Werte in einer Antigenkonzentration von 500 ng / ml. Die Arbeitskonzentration von NBSM6 beträgt 50 ng / ml und die Arbeitskonzentration von NBSM6-BT beträgt 25 ng / ml. Die spezifische DPEG-Biotinylierung wird verwendet. Nach der Signalverstärkungsstrategie von Antikörper und Streptavidin-HRP wird die Arbeitskonzentration von NB unter der gleichen Antigenkonzentration verdoppelt. Stellen Sie die Standardkurve der beiden Antikörper bei der optimierten Arbeitskonzentration von DPEG-Biotinylierungsantigen und Antikörper fest. Unter ihnen beträgt der IC50 von NBSM6 4,0 ng / ml, was mit den vorherigen Persönlichkeitsergebnissen übereinstimmt. Innerhalb des Fehlerbereichs beträgt die Erfassungsgrenze (IC10) 0,8 ng / ml, der Linearbereich beträgt 1,5 bis 10,9 ng / ml; Das IC50 von NBSM6-BT beträgt 2,1 ng / ml, die Erfassungsgrenze beträgt 0,3 ng / ml, der Linearbereich beträgt 0,6 bis 6,9 ng / ml, das ELISA-Verfahren unter Verwendung der Signalverstärkungsstrategie. Die Empfindlichkeit ist ungefähr verdoppelt.

Die oben genannten beziehen sich auf die relevanten Informationen über DPEG-Biotinylierungsinhalte, wenn Sie an der viskosen spezifischen DPEG-Biotinylierung von molekularbiologischer Biologie interessiert sind. -kang.com.


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